admin (十二)发明专利申请
(21)申请编号201310085109.5
(22)申请日期2013.03.15
(71)申请人浙江中医药大学
地址310053杭州滨江区滨文路，浙江省
548号
(72)发明家丁志山、张福胜、李伟平、吕迪、黄杰、郑东经、黄连粉、陈怡涛。
(74)专利代理公司杭州天庭专利事务所有限公司33201
代理人黄美妍冷红梅
(43)申请公布日期2013.06.26
(54)发明的名称
白色和种子的繁殖方法
(57)摘要
本发明提供了一种方法：(1)将采集的白色和种子播种到适当的土壤介质中，倒入适量的1/2毫秒无糖培养液。
(2)播种后，将白天的生长温度控制在15 ~ 25，空气的相对湿度保持在70%以上，上面覆盖着塑料薄膜，遮阴。(3)播种一周后去除遮光，及时给定时喷雾营养液浇水，保持湿润。(4)播种一个月后撒适量的磷肥后，在地下长出球茎，及时浇水除草，直到移植为止。
采用本 发明方法，可在短时间内大量繁育白及的种苗，有 效满足种植业对种苗的需求。CN 103168590 A
权 利 要 求 书
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1. 一种白及种子的繁殖方法，所述方法包括 ：
（1）将采集的白及种子播种至适宜的土壤介质中，并浇淋适量 1/2MS 无糖培养液 ；
（2）种子播种后，控制白天生长温度为 15 ～ 25℃，空气相对湿度保持在 70% 以上，上方 用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网进行遮阴 ；
（3）种子播种一周后除去遮阳网，定时喷雾营养液并适时浇水保持湿润 ；所述营养液组 成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0 ～ 1.0mg/L，溶剂为 1/2MS 或 MS 无糖培养 液 ；
（4）种子播种一个月后施适量磷肥，并适时浇水除草施肥，直至地下长出球茎后进行移 栽。
2. 如权利要求 1 所述的方法，其特征在于所述白及种子先在添加 0 ～ 2.0mg/L6- 苄氨 基嘌呤的 1/2MS 或 MS 培养液中培养 1 ～ 2 个月，得到萌发后的白及种子再播种至土壤介质 中。
3. 如权利要求 1 所述的方法，其特征在于步骤（1）所述土壤介质为泥炭土。
4. 如权利要求 1 所述的方法，其特征在于步骤（1）所述土壤介质为营养土、蛭石、珍珠 岩质量比 20 ：1 ～ 5 ：1 ～ 5 的混合物。
5. 如权利要求 1 所述的方法，其特征在于步骤（3）所述营养液组成如下 ：6- 苄氨基嘌 呤 1.0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0.5 ～ 1.0mg/L，溶剂为 1/2MS 或 MS 无糖培养液。
一种白及种子的繁殖方法
( 一）技术领域
[0001] 本发明涉及一种白及种子的繁殖方法。
（二）背景技术
[0002] 白及为兰科植物白及（Bletilla sfriata(Thunb..）的干燥块茎，大多 野生于山野川谷的向阳山坡、疏林中、草丛中，喜欢阴凉的湿度较大的环境，土壤肥沃疏松 而又排水良好的夹沙土。所以，要求生存环境独特的白及的资源是有限的，目前，野生资源 的产地仅剩下云、贵、川、湘等极其有限的少数地域的偏远山野。
[0003] 白及为多年生草本，植株矮小（未经人工选育的野生种质资源），紫花白及高 30 厘
米左右，四川峨眉白花大白及高 33 厘米以上。白及叶 3-6 片，长披针形，中部稍宽，先端尖。
白及 3 月萌发，花期 4-5 月，果期 8-10 月。12 月倒苗。白及虽然结果，但是，却不能依靠种 子繁衍。成熟的白及种子呈橄榄型，黄色粉沫状，非常细小，种皮为单层细胞组成，侧壁加 厚，细胞器及原生质均已消失，是一层半透明的死细胞，胚椭圆型，未分化，为原胚阶段，胚 柄退化，无胚乳。在自然状态下，极少萌发成苗。目前，白及目前主要依靠块茎繁殖，是典型 的 1+1=2 繁殖方式。长期无性繁殖，不仅繁殖速度慢，而且与耗种量大，还与用药争夺原料， 长期无性繁殖，易引起种性退化，很难适应规模化种植的需要。而且土地连年耕作，白及鳞 茎积累了大量病毒，严重影响了其产量和品种。
[0004] 为此，有学者试图通过组织培养的方式，以解决白及繁殖效率低及病毒感染等问 题，并且已经取得了可喜成绩。然而，总结白及组培快繁生产技术，存在以下问题 ：白及鳞 茎、茎段含有大量内生真菌及病毒，组培污染率高，成功率低 ；利用白及茎尖生长点和种子 组培虽然成功率高，但从脱分化、增殖、分化、炼苗直到移栽周期长，至少 5 个月左右（兰科 植物生长普遍缓慢），而且期间要更换好几次培养基，工作量大，成本及技术含量高，一般企 业和个体户药农根本做不到 ；为此，仍然没有根本性解决白及存在的问题，至今白及价格一 直呈现上涨趋势或许是最好也是最直接的印证。为此，仍然有必要寻求更好、更经济便捷的 繁殖和种植技术方法，扩大生产以满足市场需求。
[0005] 目前，白及人工繁育的研究工作进展十分缓慢，这是白及野生改家种研究的一个 关键课题。这种生长环节的奥秘性超越了绝大多数生产者的认识水平，由此可知，目前白及 家种只能以假鳞茎为种苗，并且只有当年生，具有老杆和嫩芽的假鳞茎才能发展成新植株。 白及发展家种，必须要面临种子秧苗稀缺的困境。再者这种传统的分株繁殖方式，不可避免 地产量低下，抗病虫害能力差，一代一代退化。由于种苗紧缺，大规模产业化种植就目前来 说还遥不可及。
（三）发明内容
[0006] 本发明针对白及繁殖效率低、大多依靠无性繁殖的问题，提供了利用种子繁殖快 速高效培育优质种苗的方法。
[0007] 本发明采用的技术方案是 ：
[0008] 一种白及种子的繁殖方法，所述方法包括 ：
[0009] （1）将采集的白及种子（每年 8 ～ 9 月采集）播种至适宜的土壤介质中，并浇淋适 量 1/2MS 无糖培养液 ；白及种子细小无胚乳，所以需播种与泥炭土、营养土等有机质丰富的 土壤中 ；白及种子在播种之前，通常需要经消毒处理，可直接对蒴果进行消毒，也可将蒴果 中的种子取出后进行消毒 ；
[0010] （2）种子播种后，控制白天生长温度为 15 ～ 25℃，空气相对湿度保持在 70% 以上， 上方用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网适当遮阴 ；
[0011] （3）种子播种一周后除去遮阳网，定时喷雾营养液并适时浇水保持湿润（每周一 次，每次 200 ～ 1500mL/m2）；所述营养液组成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0 ～ 1.0mg/L，溶剂为 1/2MS 无糖培养液或 MS 无糖培养液 ；
[0012] （4）种子播种一个月后施适量磷肥（如过磷酸钙，用量为 5 ～ 15g/m2），并按常规方
法进行科学管理，适时浇水除草施肥（如花宝 1 号，用量为 0.2 ～ 0.8g/m2），直至地下长出球 茎后进行移栽。
[0013] 优选的，所述白及种子先在添加 0 ～ 2.0mg/L6- 苄氨基嘌呤（为 0 则不添加，优选 1.0mg/L）的 1/2MS 培养液或 MS 培养液中培养 1 ～ 2 个月，得到萌发后的白及种子再播种至 土壤介质中。
[0014] 步骤（1）所述土壤介质为泥炭土。
[0015] 步骤（1）所述土壤介质为营养土、蛭石、珍珠岩质量比 20 ：1 ～ 5 ：1 ～ 5 的混合物。 [0016] 步骤（3）所述营养液组成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 1.0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0.5 ～ 1.0mg/L，溶剂为 1/2MS 无糖培养液或 MS 无糖培养液 ；
[0017] 在本发明中，MS 培养液及 MS 无糖培养液配方举例如下 ：
[0018] 大量元素母液 ：NH4NO316.5g ；MgSO4·7H2O3.7g ；KH2PO41.7g ；KNO319g，加水溶解，定 容至 500ml ；
[0019] 钙盐母液 ：CaCl23.32g，加水溶解，定容至 500ml ；
[0020] 微 量 元 素 母 液 ：KI0.0415g ；Na2MoO4·2H2O0.0125g ；H3BO30.31g ；
CuSO4·5H2O0.00125g ；MnSO4·H2O0.845g ；CoCl2·6H2O0.00125g ；ZnSO4·7H2O0.43g，加水溶
解，定容至 500ml ；
[0021] 铁盐母液 ：EDTA 二钠 3.725g，加 100ml 水加热溶解，FeSO4·7H2O2.785g，加 100ml
水溶解后两者混匀，加水配成 500ml ；
[0022] 维生素母液 ：盐酸吡哆醇（VB6）0.025g ；盐酸硫胺素（VB1）0.025g ；烟酸 0.025g， 甘氨酸 0.1g，加水溶解，定容至 500ml ；
[0023] 配 1LMS 培养液 ：取大量元素母液 50ml，钙盐母液 50ml，微量元素母液 10ml，维生 素母液 10ml，铁盐母液 5ml，加肌醇 0.1g，蔗糖或白砂糖 20 ～ 30g，蒸馏水定容至 1L。 [0024] 配 1LMS 无糖培养液 ：取大量元素母液 50ml，钙盐母液 50ml，微量元素母液 10ml， 维生素母液 10ml，铁盐母液 5ml，加肌醇 0.1g 配 1LMS 培养液 ：取大量元素母液 50ml，钙盐 母液 50ml，微量元素母液 10ml，维生素母液 10ml，铁盐母液 5ml，加肌醇 0.1g，蔗糖或白砂糖 20 ～ 30g。
[0025] 1/2MS 培养液指溶液中所含的大量元素和钙盐为 MS 培养液的一半，其他不变。
[0026] 1/2MS 无糖培养液指溶液中所含的大量元素和钙盐为 MS 无糖培养液的一半，其他
不变。
[0027] 白及虽然结果，但是，却不能依靠种子繁衍。成熟的白及种子呈橄榄型，黄色粉沫 状，非常细小，种皮为单层细胞组成，侧壁加厚，细胞器及原生质均已消失，是一层半透明的 死细胞，胚椭圆型，未分化，为原胚阶段，胚柄退化，无胚乳。在自然状态下，极少萌发成苗。 目前，白及目前主要依靠块茎繁殖，是典型的 1+1=2 繁殖方式。白及人工繁育的研究工作 进展十分缓慢，这是白及野生改家种研究的一个关键课题。这种生长环节的奥秘性超越了 绝大多数生产者的认识水平，由此可知，目前白及家种只能以假鳞茎为种苗，并且只有当年 生，具有老杆和嫩芽的假鳞茎才能发展成新植株。白及发展家种，必须要面临种子秧苗稀缺 的困境。再者这种传统的分株繁殖方式，不可避免地产量低下，抗病虫害能力差，一代一代 退化。由于种苗紧缺，大规模产业化种植就目前来说还遥不可及。利用本发明，可在一年时 间内得到大量的白及优质种苗。
[0028] 本发明的有益效果主要体现在 ：采用本发明方法，可在短时间内大量繁育白及的 种苗，有效满足种植业对种苗的需求。
（四）具体实施方式
[0029] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此 ：
[0030] 实施例 1 ：
[0031] 1) 于 8 月底采集成熟未开裂的白及蒴果 ；
[0032] 2) 将蒴果切开，取出其中的种子，在水中浸泡两天，播种到泥炭土中，浇透水，上方 用地膜覆盖后再盖一层遮阳网，种子播种的环境为人工单栋大棚，大棚顶部遮阳网覆盖，大 棚中每日定时喷水，保持湿度在 70% 以上 ；
[0033] 3) 种子播种一周后去除表面覆盖的遮阳网，每周喷雾一次 1/2MS 无糖培养液（每 次约 800mL/m2），并适时浇水，忌干燥缺水。
[0034] 4) 种子播种一个月后去除表面覆盖的薄膜，并浇 10g/L 的过磷酸钙（约 1000mL/ m2），以促进幼苗的生根。
[0035] 5) 在此之后进行科学的管理，主要是适时浇水除草，喷施页面肥，（花宝 1 号，1000 倍稀释，每两周于茎叶部喷洒 1 次，约 500ml/m2），一年后可得地下具球茎的白及幼苗。 [0036] 实施例 2 ：
[0037] 具体方法同实施例 1，与实施例 1 不同的是，步骤 2）中的白及蒴果先用 75% 酒精和 0.1% 升汞消毒后切开蒴果，得白及无菌种子，播种到 1/2MS 培养液中培养一个半月，用纱布 过滤，得萌发后的白及种子，然后播种到泥炭土中。步骤 3）中所用营养液为 1/2MS 无糖培 养液 +1.0mg/L1- 萘乙酸和 +2.0mg/L6- 苄氨基嘌呤 ；
[0038] 按照上述方法，一年后可得地下具球茎的白及幼苗。
[0039] 实施例 3 ：
[0040] 具体方法同实施例 2，与实施例 2 不同的是，白及种子萌发时播种的营养液为 MS 培 养液 +1.0mg/L6- 苄氨基嘌呤。
[0041] 按照上述方法，一年后可得地下具球茎的白及幼苗。
[0042] 实施例 4 ：
[0043] 具体方法同实施例 2，与实施例 2 不同的是，步骤 2）中种子萌发后播种到营养土 ： 蛭石 ：珍珠岩为 20 ：1 ：1。
[0044] 按照上述方法，一年后可得地下具球茎的白及幼苗。
[0045] 最后，还需注意的是，以上实施例子仅是本发明的若干个具体实施例子，本发明不 限于上述的实施例，还有许多变形，本领域相关的人员能从本发明内容中直接导出或者联 想出的所有变形，均认为是本发明的保护范围。